edc是什么化學(xué)試劑的簡(jiǎn)稱 edc是什么化學(xué)材料？很多人不了解，今天本站為大家?guī)?lái)相關(guān)內(nèi)容，下面小編為大家整理介紹。

固相合成多肽的聚合物載體及連接分子

1.聚合物載體固相合成肽需要一個(gè)固相載體和一個(gè)將固相與反應(yīng)物連接起來(lái)的接頭。固相合成的成功取決于載體和連接體的正確選擇。用于固相合成肽的載體多為聚苯乙烯及二乙烯基苯和苯乙烯共聚物等高聚物的衍生物，如氯 樹脂、Pam樹脂、王氏樹脂和氨基樹脂等.樹脂的溶脹狀態(tài)對(duì)縮合試劑和羧基組分的自由擴(kuò)散、肽鏈間的聚集及其他與縮合反應(yīng)有關(guān)的因素有明顯的影響。為了使載體具有良好的溶脹性能，有足夠大的網(wǎng)絡(luò)空間容納不斷增長(zhǎng)的較長(zhǎng)肽鏈，便于反應(yīng)物進(jìn)入載體內(nèi)部，一般采用交聯(lián)度為1% ~ 2%的聚苯乙烯珠樹脂或微孔樹脂。

2.連接分子固相合成肽使用了與不同連接分子結(jié)合的聚合物，這些連接分子是含有氯甲基、巰基甲基、酰氯、對(duì)苯甲?；?、芳基磺酰氯、烯丙基、琥珀?；?、鄰硝基苯甲醇和二苯基氯硅烷的雙功能化合物。一個(gè)理想的接頭分子在整個(gè)合成過(guò)程中必須非常穩(wěn)定，并且合成后可以定量切割，不會(huì)破壞合成的目標(biāo)分子。根據(jù)與樹脂連接的肽的C-末端的結(jié)構(gòu)類型，合適的接頭分子應(yīng)該被切割以產(chǎn)生相應(yīng)的衍生物，例如羧酸、酰胺或氨基醇。

固相合成多肽的檢測(cè)

即使偶聯(lián)技術(shù)高效，也不能保證100%的?；磻?yīng)。此外，當(dāng)遇到空間位阻或 2層狀序列時(shí)，偶聯(lián)反應(yīng)的效率大大降低。聚合物載體上總有缺失或截短的多肽鏈，它們?cè)卺尫艜r(shí)也會(huì)進(jìn)入產(chǎn)品，給分離帶來(lái)很大困難。所以固相肽合成時(shí)每個(gè)氨基酸的縮合率都要達(dá)到99.9%，尤其是長(zhǎng)肽，否則產(chǎn)品會(huì)很不純。因此，監(jiān)控每個(gè)反應(yīng)步驟的進(jìn)展非常重要。(杭州專肽生物有20多年的固相合成經(jīng)驗(yàn)，可以滿足大部分客戶的需求。)

1 定性顏色反應(yīng)茚三酮比色法(Kaiser法)是通過(guò)茚三酮顯色反應(yīng)快速測(cè)定樹脂上的氨基，從而判斷?；磻?yīng)是否完全。茚三酮法檢測(cè)聚苯乙烯樹脂中氨基的靈敏度可達(dá)5 mol/g，以此靈敏度可檢測(cè)縮合反應(yīng)是否超過(guò)99%。檢測(cè)茚三酮時(shí)，由于末端氨基酸殘基和序列的不同，顏色強(qiáng)度也不同。天冬氨酸(Asp)和天冬酰胺(Asn)會(huì)產(chǎn)生淡藍(lán)色或淺棕色。顯色劑2，4，62三硝基苯磺酸與樹脂上的氨基反應(yīng)呈橙紅色，靈敏度為5mol/g樹脂。

Kaiser試劑包括：

a、6%茚三酮的乙醇溶液

b、80%苯酚的乙醇溶液

c、2%0.001MKCN的2%吡啶溶液

制備的吡啶需要用茚三酮處理，然后重新蒸熟后才能使用。檢測(cè)過(guò)程中，取少量樹脂，分別加入A、B、C各2-3滴，100加熱1-2分鐘。如果溶液呈藍(lán)色，或者樹脂呈藍(lán)色或紅棕色，說(shuō)明還有游離氨基；否則，連接完成。檢測(cè)游離氨基還有其他方法：三硝基苯磺酸法、苦味酸法、溴芬法等。

可用于測(cè)定肽接枝2 定量自由氨基檢測(cè) 水楊醛法 后樹脂上殘留氨基的量和脫保護(hù)基后氨基的總量，并可定量檢測(cè)縮合反應(yīng)和脫保護(hù)基反應(yīng)是否完全。如果不完整，可以及時(shí)反復(fù)處理。2%水楊醛和6%吡啶乙醇溶液與樹脂上的氨基反應(yīng)(60，30 ~ 35分鐘)。清洗后，用5%芐胺乙醇溶液代替水楊醛(60，30分鐘)。用芐胺乙醇溶液稀釋后，在315nm處讀取光吸收值，計(jì)算氨基數(shù)量(=4.36對(duì)于NH2大于0.15mol/mg樹脂的樣品，該方法的相對(duì)偏差小于5%。

在3 HPLC檢測(cè)部分保護(hù)的中間肽多肽的合成過(guò)程中，將少量的肽樹脂(3 ~ 10 mg)裂解，用乙醚沉淀，溶解在適當(dāng)?shù)娜軇┲?，直接進(jìn)行高效液相色譜分析。當(dāng)肽I

反應(yīng)溶劑

二甲基甲酰胺(DMF)和二氯甲烷(DCM)是多肽固相合成中常用的溶劑，尤其是DMF因其對(duì)反應(yīng)產(chǎn)物和產(chǎn)物的高溶解性而被廣泛應(yīng)用于許多反應(yīng)體系中。DMF雖然溶解度較好，但沸點(diǎn)較高，需要減壓蒸發(fā)。此外，副產(chǎn)物N-?；逶诟呓殡姵?shù)的溶劑中容易產(chǎn)生[〔DMF，乙腈(CH3CN)，二甲基亞砜(DMSO)，H2O等。]，而在低介電常數(shù)的溶劑(CH2Cl2、CCl4、C6H6等)中不易產(chǎn)生。).在非極性溶劑中，N-保護(hù)氨基酸能迅速與DCC反應(yīng)生成對(duì)稱酸酐。所以只要能溶解反應(yīng)物，就盡量選擇介電常數(shù)低的溶劑。在固相合成中，DCM多用作溶劑，它有兩個(gè)優(yōu)點(diǎn)：比DMF消旋率小，N-?；迳陕?。當(dāng)羧基成分難以溶解時(shí)，可以加入幾滴再蒸的DMF幫助溶解。

縮合試劑主要有:碳化二亞胺型，鹽型(脲)

碳二亞胺型

主要有DCC、DIC、EDC。HCl等。將DCC用于反應(yīng)，并將反應(yīng)中產(chǎn)生的DCU溶解在DMF中。

度很小，產(chǎn)生白色沉淀，所以一般不用在固相合成中，但是由于其價(jià)格便宜，在液相合成中，可以通過(guò)過(guò)濾除去，應(yīng)用仍然相當(dāng)廣泛。EDC.HCl因?yàn)槠渌芙庑缘奶攸c(diǎn)，在多肽與蛋白的連接中使用比較多，而且也相當(dāng)成功。但是該類型的縮合試劑的一個(gè)最大的缺點(diǎn)，就是如果單獨(dú)使用，會(huì)有比較多的副反應(yīng)，但是研究表明如果在活化過(guò)程中添加HOBt，HOAt等試劑，可以將其副反應(yīng)控制在很低的范圍。

鎓鹽型

鎓鹽型縮合試劑反應(yīng)活性高，速度快，現(xiàn)在使用非常廣泛，主要包括：HBTU，TBTU，HATU，PyBOP等。該試劑使用過(guò)程中需要添加有機(jī)堿，如，二異丙基乙胺（DIEA），N-甲基嗎啉（NMM），該試劑加入后，才能活化氨基酸。

固相合成過(guò)程

1、羥基樹脂為載體的合成方法（Wang樹脂為例：圖1）

Wang樹脂、PAM樹脂、HMPA樹脂、Sasrin樹脂等均在Linker結(jié)構(gòu)中含有芐醇基。多數(shù)情況下把預(yù)制的N一保護(hù)氨基酸的對(duì)稱酸酐及催化劑DMAP(對(duì)二甲氨基吡啶)與羥基樹脂一起反應(yīng)。在這種成鍵反應(yīng)中。DMAP是必需的，但也由此帶來(lái)一些麻煩。例如，當(dāng)某些位阻較大、反應(yīng)活性較低的Fmoc-氨基酸需要較長(zhǎng)的反應(yīng)時(shí)間，而且DMAP的純度又不理想時(shí)。會(huì)發(fā)生部分Fmoc基被脫除，生成部分二肽的麻煩。更常見(jiàn)的危險(xiǎn)是當(dāng)Cys及His作為C端第一個(gè)氨基酸與羥基樹脂反應(yīng)時(shí)，DMAP往往使這兩種氨基酸發(fā)生消旋化。對(duì)此，解決辦法是改用Cl-Trt樹脂與這兩種氨基酸鍵合，同樣可以生成酯型Linker。另一種解決辦法是用MSNT試劑，可以有效地免除Cys, His與多種羥基樹脂鍵合時(shí)的消旋化危險(xiǎn)。

　　

圖1 固相多肽合成

2.以三苯甲基樹脂樹脂為載體的合成方法（圖2）

三苯甲基(trt)樹脂含有三重芐基結(jié)構(gòu)，因此反應(yīng)活性極高。一般用等摩爾量的保護(hù)氨基酸及4倍量的DIEA與Trt樹脂混在二氯甲烷中，室溫反應(yīng)30-12Omin即達(dá)完全。對(duì)于未反應(yīng)完全的位點(diǎn)，可用甲醇封住位點(diǎn)?；赥rt Linker的溫和鍵合及溫和裂解特點(diǎn)，在此種樹脂上進(jìn)行膚片段縮合及全保護(hù)基膚片段制備是較理想的方式。

　　

圖2 固相多肽合成

FMOC固相合成Glu-Trp

3以氨基樹脂為載體的合成方法

MBHA樹脂、PAL樹脂、Knorr樹脂、Rink-NH2樹脂等均在Linker中含有可與羧酸反應(yīng)的氨基。C端第一個(gè)氨基酸與之鍵合的反應(yīng)條件與接肽循環(huán)中的操作完全相同。如果以DCC為縮合劑，一般先將N-保護(hù)氨基酸與DCC、HOBT混于溶劑(DMF、THF、DCM等)中，生成氨基酸的HOBT活潑酯，放置3-5h，待活化反應(yīng)基本完全后濾除副產(chǎn)物DCU沉淀，把羧基活化組分溶液與氨基樹脂混合進(jìn)行鍵合反應(yīng)。此步反應(yīng)有兩點(diǎn)事項(xiàng)值得注意:①多數(shù)氨基樹脂的氨基并非以游離狀態(tài)出售。有的氨基是以鹽酸鹽的形式，有的則帶有臨時(shí)保護(hù)基(如Fmoc , Boc等），因此在與C端第一個(gè)氨基酸鍵合之前必須進(jìn)行相應(yīng)的中和或脫除臨時(shí)保護(hù)基的處理;②氨基酸活化組分的用量應(yīng)大大高于氨基樹脂組分，一般的摩爾比為（2-5）：1，目的是使鍵合反應(yīng)接近100% ,因?yàn)槲幢货；陌被鶚渲瑹o(wú)法從產(chǎn)物中清除出去。使用大大過(guò)量的構(gòu)件是所有固相有機(jī)合成的共同之處。

除了DCC之外，其他常見(jiàn)的縮合劑還有DIC、EDC、EEDQ、HBTU等。

　　

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